Краска для ретикулоцитов

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями

Краска для ретикулоцитов

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

см. также статьи Ретикулоциты и Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Можно использовать один из следующих красителей:

  1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
  2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% – 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
  3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Микроскоп.

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски.

В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин.

Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Окраска ретикулоцитов
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Reticulocytes

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения.

Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

  • Справочник “Лабораторные методы исследования в клинике” под редакцией Меньшикова В. В. – Москва, “Медицина”, 1987 г
  • Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы – “Клинические лабораторные исследования” – Москва, “Медицина”, 1984 г.

Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Тельца Жолли (тельца Хауэлла-Жолли) – мелкие круглые фиолетово-красные включения размером 1 – 2 мкм, встречаются по 1 (реже по 2 – 3) в одном эритроците. Предсталяют собой остаток ядра после удаления его РЭС. Выявляются при интенсивном гемолизе и “прегрузке” РЭС, после спленэктомии, при мегалобластной анемии..

Раздел: Гемоцитология

Читать

Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).

Раздел: Цитохимия

Читать

Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче.

Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи.

По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Раздел: Анализ мочи

Читать

Источник: http://www.clinlab.info/Hemocytology/Reticulocytes-counting-49

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим

Краска для ретикулоцитов

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут.

Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Подсчет ретикулоцитов

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Интерпретация результатов

Для исследования были отобраны 20 образцов крови для определения уровня глюкозы и гликозилированного гемоглобина с «Сахарным диабетом» в анамнезе у пациентов отделения «Эндокринология” ГБУЗ «навлинскаяя ЦРБ»для дальнейшего исследования значения гемоглобина, ретикулоцитов, эритроцитов. Исследования проводились на базе клинической лаборатории.

Для точной интерпретации результатов необходимо вспомнить нормальные показатели: глюкозы- 3,3-5,5ммоль/л и гликозилированного гемоглобина от 4% до 5,9% .

Материал для исследования уровня глюкозы и гликозилированного гемоглобина: негемолизированная кровь.

Для исследования данных показателей кровь берут натощак. Желательно сдавать кровь до 10 – 10.30.часов утра. За день до сдачи анализа по возможности исключить тренировки и стрессы, за полчаса до забора крови желательно находится в спокойном состоянии.

На основании результатов исследования20 образцовкрови была выявлена группа образцов с повышенным содержанием глюкозыгликозилированного гемоглобина. Результаты исследования представлены в таблице 2.1.

Таблица 2. 1. – Показатели уровня глюкозы и гликозилированного гемоглобина у группы исследуемых пациентов.

№ образца крови Уровень глюкозы в крови, ммоль/л Уровень гликозилированного гемоглобина, %
1 3,6 5,4
2 6,2 6,8
3 6,0 7,9
4 5,2 3,7
5 3,4 5,1
6 4,8 6,7
7 4,7 4,6
8 3,8 5,3
9 5,6 6,8
10 6,5 6,6
11 5,3 5,5
       12 3,2 7,1
13 5,8 6,7
14 5,3, 6,0
15 5,8 6,9
16 4,4 5,6
17 3,2 4,6
18 6,6 7,8
19 4,9 4,4
20 3,3 4,5

Анализируя полученные результаты таблицы 2.1 в ходе исследования образцов крови с нормальным уровнем глюкозы для определения значений гликозилированного гемоглобина можно заметить следующее:

1) У 1,2,3,5,6,7,8,11,14,16,17,18,20 образцов крови уровень глюкозы и уровень гликозилированного гемоглобина, находятся в диапазоненормальных величин.

2) У образцов 2 , 3 ,9, 10,12,13,15,18нормальный показатель глюкозы, но уровень гликозилированного гемоглобина находится выше нормы. Можно предположить, что на следствие изменения гликозилированного гемоглобина повлияла, длительная гипергликемия.

В определении уровня гемоглобина, уровня эритроцитов и процентный уровень ретикулоцитов в крови с повышенным содержанием глюкозы были исследованы 8 образцов крови.

Таблица 2.2. Определение уровня эритроцитов, гемоглобина и ретикулоцитов в образцах с повышенным содержанием глюкозы.

Номер образца крови Пол Уровень глюкозы в крови, ммоль/л Уровень гемоглобина г/л Уровень эритроцитов /л Уровень ретикулоцитов %
2 ж 6,2   158 5,1 1,3
3 м 6,0 171 4,7 1,4
9 м 5,6 113 5,8 1,6
10 ж 6,5 117 0,1 20,8
12 ж 3,2 161 4,2 20,6
13 м 5,8 156 4,5 4,6
15 ж 5,8 154 6,1 1,4
18 м 6,6 135 6,5 1,3

Анализируя полученные результаты были выделены 3 группы:

1)  у 2,13,18 исследуемых анализов крови уровень гемоглобина в норме, уровень эритроцитов в норме, уровень ретикулоцитов в норме.

2)  у 3 и 12 уровень гемоглобина повышен, уровень эритроцитов повышен, уровень ретикулоцитов повышен, можно предположить что повышение глюкозы не носит постоянный характер и системы гемопоэза компенсирует недостаток гемоглобина и эритроцитов возникший вследствие повышения гликозированного гемоглобина.

3) у 9,10,15 уровень гемоглобина повышен, уровень эритроцитов понижен, уровень ретикулоцитов повышен. Можно предположить, что уровень глюкозы повышается довольно часто и некомпенсированн медикаментозно в следствие этого возникают признаки анемии, а именно снижение гемоглобина и повышение эритроцитов и ретикулоцитов. 

Наглядно выводы, сформулированные при анализе результатов исследования проб крови у пациентов с повышенным уровнем глюкозы можно рассмотреть на диаграмме 2.1.

Диаграмма 2.1.- Зависимость уровня глюкозы и  количества ретикулоцитов

Рассмотрев данную диаграмму 2.1 можно заметить, что уровень глюкозы повышается в следствии углеводного обмена. Показателем длительности некомпенсированного сахарного диабета является высокий уровень гликозилированного гемоглобина.

При не частых повышениях данных показателей крови система гемопоэза восполняет необходимое для протекания физиологических процессов количество эритроцитов, наполненных гемоглобином – белком переносчиком кислорода к тканям и органам.

Исходя из выше сказанного при стойком повышении в крови глюкозы и гликозилорованного гемоглобина происходит повышение ретикулоцитов как предшественников эритроцитов.

Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 513;

Источник: https://studopedia.net/10_21050_metod---okraska-retikulotsitov-v-probirke-brilliantovim-krezilovim-sinim.html

Суправитальный метод окраски ретикулоцитов

Краска для ретикулоцитов

Принцип:

Выявлениезернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитовпри окраске бриллиант-крезиловым синимбез предварительной фиксации.

Реактивы:

1% раствор бриллиант-крезилового синего:50 мг краски растворяют в 5 мл физиологическогораствора и добавляют 20 мг цитрата натрия(раствор хранят в посуде из темногостекла, годен в течение несколькихдней).

Методика:

Напредметное стекло с лункой наносят 2капли 1 % раствора краски бриллиантовогокрезилового синего и 1 каплю крови.Осторожно перемешивают стекляннойпалочкой и смесь помещают во влажнуюкамеру (чашку Петри, в которую по краямвкладывают слегка смоченные валикимарли или ваты) на 30 минут при комнатнойтемпературе. Затем делают мазки ивысушивают.

Подсчетретикулоцитов:

Вмазках эритроциты окрашиваются вжелтовато-зеленый цвет, а зернисто-сетчатаясубстанция в ретикулоцитах – в синий ифиолетовый цвет.

Мазкимикроскопируют с иммерсионным объективом.Подсчет ретикулоцитов производят на1000 эритроцитов (большая точностьполучается при подсчете 2000-3000 эритроцитов).

Увеличениечисла ретикулоцитов наблюдаетсяпри:

  • стимуляции эритропоэза (кровопотеря, гемолиз, ретикулоцитарный криз при успешном лечении В12-дефицитной анемии, острый недостаток кислорода).

Уменьшениечисла ретикулоцитов наблюдаетсяпри:

  • угнетении эритропоэза (апластические и гипопластические анемии, нелеченные В12-дефицитные анемии, метастазы рака в кости),
  • заболеваниях почек, эндокринных заболеваниях.

Увеличениеретикулоцитов их в периферической крови(ретикулоцитоз) отмечается:•при гемолитическиханемиях (числоретикулоцитов может доходить до 60% иболее (особенно сильно увеличиваясьпри гемолитических кризах);•при острых кровопотерях (на 3 – 5 суткипосле кровопотери возникает ретикулоцитарныйкриз), в том числе, увеличение ретикулоцитовпозволяет заподозрить скрытое кровотечение(например, у больных язвенной болезньюжелудочно-кишечного тракта, брюшнымтифом);•при малярии; •при полицитемии; •при лечении железом железодефицитныханемий (через несколько дней (3 – 10) посленачала антианемического леченияпернициозной анемии); •при остром недостатке кислорода;•при метастазах опухолей в костныймозг. Следуетпомнить,что в случае усиленного разрушенияэритроцитов доля ретикулоцитов можетпревышать 50% вследствие искусственногозавышения числа ретикулоцитов (как ужебыло отмечено ранее, доля ретикулоцитоврассчитывается в % от всех эритроцитов).В таких случаях ля оценки тяжести анемийиспользуют «ретикулярный индекс»,который рассчитывают по формуле: (%ретикулоцитов х гематокрит) / 45 х 1,85, где45 – нормальный гематокрит, 1,85- количествосуток, необходимых для поступленияновых ретикулоцитов в кровь. Если индекс< 2 – говорит о гипопролиферативномкомпоненте анемии, если > 2-3, то происходитувеличение образования эритроцитов. Истинныйретикулоцитоз:увеличение количества ретикулоцитовв периферической крови с одновременнымувеличением количества ретикулоцитовв костном мозге.  Ложныйретикулоцитоз:отсутствие повышенного количестваретикулоцитов в костном мозге приповышении их количества в периферическойкрови (что говорит об усилении вымыванияретикулоцитов из костного мозга впериферическую кровь). Фактором,приводящим к увеличению значения %-огосодержания ретикулоцитов могут бытьприем следующих препаратов: кортикотропин,противомалярийные лекарственныесредства, жаропонижающие препараты,фуразолидона (у маленьких детей),леводопы.  Запомните:ретикулоцитоз, без соответствующейэритронормобластической реакциикостного мозга, наблюдается прираздражении отдельных участков егораковыми метастазами или воспалительнымиочагами. Возможнойошибкой при подсчете ретикулоцитовможет быть их ложное завышение из-заналичия: •включений в эритроцитах (тельца Жолли,малярийные паразиты); •высокого лейкоцитоза;•аномальной формы гемоглобина;•гипертромбоцитоза;•гигантских тромбоцитов. Снижениеколичества или отсутствие ретикулоцитов(ретикулоцитопения) наблюдается:•при арегенераторных апластических игипопластических анемиях; •при анемиях, вызванных недостаточностьюсодержания железа, витамина B12, фолиевойкислоты (микроцитарно-гипохромные имегалобластные анемии); •при талассемии; •при сидеробластной анемии; •при метастазах рака в кость; •при лучевой болезни и лучевой терапии; •при лечении цитостатиками;•при аутоиммунных заболеваниях системыкроветворения; •при заболеваниях почек; •при алкоголизме; •при рецидиве анемии Аддисона-Бирмера;•при микседеме. Факторы,искажающие результат лабораторногоисследования %-ого содержанияретикулоцитов:•неправильный выбор антикоагулянта илинедостаточное перемешивание крови сантикоагулянтом;•длительное сдавливание руки жгутом; •прием сульфаниламидов (возможны какзаниженные, так и завышенные результаты); •переливание крови незадолго доисследования;•гемолиз пробы крови.  Показанияк назначению анализа на ретикулоциты: •оценка активности эритропоэза присостояниях, сопровождающихся гемолизомили кровопотерей;•ценка способности костного мозга крегенерации после цитотоксическойтерапии и трансплантации костногомозга;•ценка восстановления синтеза эритропоэтинапосле трансплантации почки;•допинговый контроль у спортсменов(прием эритропоэтина);•диагностика неэффективного гемопоэзаили снижения продукции эритроцитов;•дифференциальная диагностика анемий;•детекция нарушения регенераторнойспособности костного мозга при дефицитежелеза, витаминов B12, B6, фолатов, меди имониторинга соответствующей терапии;•оценка реакции на терапию эритропоэтином,эритросупрессорами.

МЕТОДЫПОДСЧЕТА КОЛИЧЕСТВА РЕТИКУЛОЦИТОВ

(1) Подсчетколичества ретикулоцитов в мазке послеокраски их специальными красителями.  Данныйметод является на практике наиболееиспользуемым методом в связи с тем, чтоон простой, достаточно дешевый и нетребует специального дорогостоящегооборудования, соответственно можетприменяться в любой клинико-диагностическойлаборатории.

Принципметода основан на выявлении зернисто-сетчатойсубстанции ретикулоцитов при суправитальнойокраске щелочными красками (насыщенныйраствор бриллиантового крезиловогосинего в абсолютном спирте / растворазура I /раствор азура II) с дальнейшимподсчетом их в мазке крови. Окраскуретикулоцитов проводят либо на стекле,либо в пробирке.

  Подсчетосуществляют с помощью микроскопа:приготовленные одним из указанных вышеспособов мазки микроскопируют симмерсионным объективом; в мазкеретикулоциты и эритроциты окрашены вжелтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатаясубстанция в ретикулоцитах – в синий(при окраске азуром II и бриллиантовымкрезиловым синим) или синевато-фиолетовыйцвет (при окраске азуром I).

(2) Подсчетколичества ретикулоцитов при помощилюминесцентной микроскопии.

  Данныйметод отличается простотой и требуетнемного времени, более точен по сравнениюс обычным методом, так как при люминесцентноймикроскопии обнаруживаются мельчайшиезерна сетчато-нитчатого вещества, однакоон возможен только при наличиилюминесцентного микроскопа и специальныхкрасителей, в связи с чем доступен лишьнемногим лабораториям.

Принципподсчета количества ретикулоцитов припомощи люминесцентной микроскопииоснован на использовании способностисубстанции ретикулоцитов флюоресцироватьпосле обработки крови акридиновыморанжевым. Кровь смешивают с акридиновыморанжевым в пробирке или смесителе всоотношении 1 часть крови и 10 частейкраски (смесь можно хранить не более 5часов).

Смесь перемешивают в течение 2минут, каплю смеси наносят на предметноестекло и накрывают покровным стеклом.При этом жидкость не должна выходитьза пределы покровного стекла.  Микроскопируютс помощью светофильтра ЖС-17.

В препаратеэритроциты имеют темно-зеленые очертанияи не флюоресцируют, а в ретикулоцитахзернисто-сетчатая субстанция светитсяярко-красным цветом, благодаря чемуретикулоциты легко подсчитать. В крови,стабилизированной гепарином или цитратомнатрия, флюоресценции ретикулоцитовне наблюдается.

(3) Автоматическийподсчет количества ретикулоцитов спомощью гематологического анализатора. Всовременных гематологических анализаторахтехнология подсчета форменных элементовкрови основана на кондуктометрическомметоде, предложенном H. Wallace и Joseph R. Culterв 1947 г.

Принцип метода заключается вподсчете числа и определении характераимпульсов, возникающих при прохожденииклетки через отверстие малого диаметра(апертуру), по обе стороны которогорасположены два изолированных друг отдруга электрода. Каждое прохождениеклетки через апертуру сопровождаетсяпоявлением электрического импульса,который регистрируется электроннымдатчиком.

Разделение клеток по категориям(эритроциты, лейкоциты, тромбоциты,осадок) осуществляется прибором наосновании анализа амплитуды полученныхимпульсов.Чтобы определить концентрациюклеток, достаточно пропустить определенныйобъем пробы через канал и подсчитатьколичество импульсов, которые при этомгенерируются.

  Следуетобратить внимание на то, что помимоклассического параметра ретикулоцитов- относительное (%) содержание ретикулоцитов(RET%, percent of reticulocytes), определяемого спомощью 1 и 2 методов лабораторнойдиагностики, в связи с появлениемвысокотехнологичных гематологическиханализаторов (3 метод) стало возможнымполучать (например, с помощьюзапатентованного флюоресцентногокрасителя для анализатора Sysmex -XT- 2000i)дополнительные информативныеретикулоцитарные параметры:• ретикулоцитыс низким содержанием РНК, наиболеезрелые (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракцияретикулоцитов с низкойфлуоресценцией);• ретикулоцитысо средним содержанием РНК (MFR%,medium fluorescence reticulocyte fractions) – фракцияретикулоцитов со среднейфлуоресценцией);• ретикулоцитыс высоким содержанием РНК (HFR%,high fluorescence reticulocyte fractions) – фракцияретикулоцитов с высокойфлуоресценцией);• незрелаяфракция ретикулоцитов (IRF%,Immature Reticulocyte Fraction). Дифференцировкаретикулоцитов, основанная на степенизрелости и, соответственно, содержаниинуклеиновых кислот, является отражениемгемопоэтической активности костногомозга. Методика(анализатор Sysmex -XT- 2000i). В проточнойкювете клетки пересекают лучполупроводникового лазера, при этомпроисходит рассеивание луча под большими малым углами и возбуждение флюоресцентногокрасителя. Это позволяет определятьразличные стадии зрелости ретикулоцитовпо содержанию РНК в клетках и интенсивностиих свечения. Автоматизированный подсчетретикулоцитов отличается высокойточностью (подсчитывается более 30 000эритроцитов) и воспроизводимостью(коэффициент вариации составляет около6%). Данная технология обеспечиваетточный подсчет ретикулоцитов даже приих предельно низких концентрациях. 

  1. Ретикулоцитопении и ретикулоцитозы, причины развития, диагностическое значение их выявления.

Источник: https://studfile.net/preview/5844876/page:15/

Красители для гематологии

Краска для ретикулоцитов

Метод окраски мазков крови по Романовскому, состоящий в использовании смеси эозина и метиленового синего, широко распространен во всем мире. Наиболее известными вариантами этого метода являются методы окраски мазков по Райту, Гимзе, Май–Грюнвальду и специальный двухкомпонентный набор для быстрого окрашивания мазков Deltalab.

��� Описание Трансп. коробка
540050набор для окрашивания ретикулоцитов в пробирках50
805013двухкомпонентный набор для быстрого окрашивания мазков крови:2фл.красителя “А”+2 фл.красителя “В”12х4х250
805013saleдвухкомпонентный набор для быстрого окрашивания мазков крови:2фл.красителя “А”+2 фл.красителя “В”
808000растовор эозина по Маю-Грюнвальду16
808001раствор эозина по Маю-Грюнвальду12
808100раствор эозина по Гимзе16
808101раствор эозина по Гимзе12
808200раствор эозина по Райту16
821раствор по Романовскому для мазков крови Диахим-ГемиСтейн-Р “Классик”8х1000

Окраска эозином – метиленовым синим по Май–Грюнвальду – налить на мазок 0,5 мл красителя Май–Грюнвальд и оставить высыхать на 3–4 минуты; – добавить равное количество воды рН 7,2 и осторожно перемешать; – оставить для окраски на 5–10 минут; – промыть мазок водой и высушить в вертикальном положении.

Окраска азур-эозином – метиленовым синим по Гимзе

– фиксировать мазок метанолом и просушить при комнатной температуре; – залить мазок раствором 10 капель красителя Гимзе в 10 мл воды рН 7,2; – оставить на 25 минут; – промыть мазок водой и высушить в вертикальном положении.

Окраска эозином – метиленовым синим по Райту

– налить на мазок 1 мл красителя Райта, через 1 минуту добавить 1 мл воды рН 7,2; – оставить мазок для окрашивания на 2–4 минуты, после чего промыть водой рН 7,2; – высушить мазок в вертикальном положении.

Набор для быстрого окрашивания мазков крови

Набор состоит из двух компонентов – красителя «А» и красителя «В», состав которых специально разработан для максимально быстрого и успешного окрашивания мазков крови и выявления широкого спектра патологий.

Метод:

– приготовьте тонкий гомогенный мазок крови. Зафиксируйте его метанолом в течение 2-3 минут. Высушите при комнатной температуре.- погрузить мазок в кювету с красителем А, подождать 5 секунд и просушить, т. е. дать краске стечь, прижав боковой край стекла к фильтровальной бумаге; – погрузить в стакан с чистой водой и просушить; – погрузить мазок в кювету с красителем В, подождать 10 секунд и просушить; – погрузить в чистую воду, вынуть мазок и высушить в вертикальном положении.Метод имеет существенное преимущество – специалист может по своему усмотрению варьировать интенсивность окраски мазка, увеличивая или уменьшая длительность экспозиции стекла в одном или в обоих красителях. Красители можно использовать многократно, но в этом случае необходимо фильтровать их каждые 4 дня.Результат окрашивания: НЕЙТРОФИЛЫ: цитоплазма розовая, мелкие гранулы – сиреневые. ЭОЗИНОФИЛЫ: цитоплазма розовая, крупные красные гранулы.МОНОЦИТЫ: цитоплазма окрашена в серый цвет. ЛЕЙКОЦИТЫ (крупные): цитоплазма светло-голубая. ЛЕЙКОЦИТЫ (мелкие): цитоплазма темно-голубая. БАЗОФИЛЫ: клетки наполнены темно-фиолетовыми гранулами. ЭРИТРОЦИТЫ: клетки бледно-красного цвета. ТРОМБОЦИТЫ: окрашены в сиренево-розовый цвет.

Набор для окрашивания ретикулоцитов (Кат. № 540050)

Ретикулоциты представляют собой эритроциты, содержащие остатки ARN (рибосом), которые реагируют с такими красителями, как брайт-крезиловый синий или новый метиленовый синий; в результате этой реакции остаточные рибосомы проявляются как волокна, отчетливо различимые при микроскопическом исследовании мазка.

Подсчет ретикулоцитов является прекрасным методом контроля эритропоэза, поскольку ретикулоциты являются той стадией развития клеток красного ряда, на которой они покидают костный мозг. Данная стадия созревания эритроцита длится около 24 часов, по прошествии этого времени клетка превращается в зрелый эритроцит.

Когда состояние анемии сопровождается большим содержанием ретикулоцитов (ретикулоцитоз), процесс рассматривается как регенеративный, т. е. костный мозг находится в процессе компенсаторного воспроизводства эритроцитов; если анемия сопровождается нормальным или сниженным количеством ретикулоцитов, нет оснований говорить о процессе компенсации и восстановления.

Подсчет ретикулоцитов может производиться в цельной крови, взятой в антикоагулянт (К-3-ЭДТА), в течение 24 часов после взятия (или более при условии хранения образцов в холодильнике при +4 °С).

Метод:

– каждая пробирка 11х55 мм (3 мл) содержит 100 мкл стабилизированного буферного раствора бриллиантового крезолового синего; непосредственно в пробирку поместить 2–3 капли крови, перемешать мягким встряхиванием и инкубировать при комнатной температуре 15-30 минут; – из содержимого пробирки приготовить мазок, микроскопировать.

Срок годности набора составляет 12 месяца; хранить при температуре от +2 до +8 °С; не рекомендуется подолгу держать на солнце; не переворачивать при транспортировке во избежание скопления красителя под крышкой пробирки.

Отзывы:

Отзывов на данный товар пока нет.

“ООО “ГЕМ” оставляет за собой право на изменение указанных цен без предварительного уведомления. Указанные цены не включают НДС, доставку, прочие налоги и сборы. Приведенные характеристики товаров, включая изображения, представлены исключительно для ознакомления и могут отличаться от реальных.

Для получения более подробной информации, пожалуйста, обращайтесь к сотрудникам компании. Логотипы и торговые марки, использованные на сайте, являются собственностью их владельцев. Данный сайт не является средством массовой информации (СМИ). Вся представленная информация не является публичной офертой, предусмотренной ст.

437 Гражданского кодекса РФ”

Преимущества работы с нами:

  • 1. Комплексное оснащение микробиологических и клинико-диагностических лабораторий “под ключ”.
  • 2. Широкий ассортимент продукции (более 3000 наименований, из них 1000 – всегда на складе).
  • 3. Европейское качество продукции.
  • 4. Эффективный логистический сервис.
  • 5. Гибкая ценовая политика.
  • 6. Квалифицированная информационная поддержка по продукции компании.
  • 7. Обширная дилерская сеть.

Вся представленная информация не является публичной офертой, предусмотренной ст. 437 Гражданского кодекса РФ. Приведенные характеристики товаров, включая изображения, представлены исключительно для ознакомления и могут отличаться. Для получения более подробной информации, пожалуйста, обращайтесь к сотрудникам компании.

Источник: http://www.hemltd.ru/catalog/kld/Diagnostics_and_reagents/stains_for_haematology.html

МедДемопат
Добавить комментарий